一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

1.了解植物組織中葉綠素的分布和性質(zhì)。

2.掌握測(cè)定葉綠素含量的原理和方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

葉綠素廣泛存在于水果、蔬菜等綠色植物組織中，與植物細(xì)胞中的蛋白質(zhì)結(jié)合形成葉綠體。當(dāng)植物細(xì)胞死亡時(shí)，葉綠素就會(huì)釋放出來(lái)。游離葉綠素非常不穩(wěn)定，對(duì)光和熱敏感。在酸性條件下，葉綠素形成綠褐色脫鎂葉綠素，在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠素酸鹽以及葉綠醇和甲醇。高等植物中的葉綠素有兩種：葉綠素a和b，均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。

葉綠素含量的測(cè)定方法有很多，包括：1.原子吸收光譜法：通過(guò)測(cè)定鎂的含量間接計(jì)算出葉綠素的含量。2.分光光度法：用分光光度計(jì)測(cè)量葉綠素提取物在較大吸收波長(zhǎng)處的吸光度值，然后可以利用朗伯-比爾定律計(jì)算提取物中各色素的含量。

葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有較大吸收，兩條吸收曲線在652nm處相交。因此，分別測(cè)定了提取物在645nm、663nm和652nm波長(zhǎng)處的吸光度值，可根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式分別計(jì)算出葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素的含量。

三、儀器、原料和試劑

儀器：分光光度計(jì)、電子頂載天平（靈敏度0.01g）、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦紙、滴管。

原料：新鮮（或干燥）植物葉子

試劑：1.96%乙醇（或80%丙酮）2.石英砂3.碳酸鈣粉。

四、操作步驟

取新鮮植物葉子（或其他綠色組織）或干燥材料，擦去組織表面污垢，并去除中脈剪碎。稱取2g新鮮剪碎的樣品，放入研缽中，加入少量石英砂、碳酸鈣粉和3mL 95%乙醇，研磨成均質(zhì)漿液，加入10mL乙醇，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3到5min。 取1張濾紙放入漏斗中，用乙醇潤(rùn)濕，將提取液沿玻璃棒倒入漏斗中，濾液倒入100mL棕色容量瓶中；用少量乙醇沖洗研缽、研棒和殘?jiān)鼣?shù)次，最后與殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小Ｓ玫喂芪∫掖?，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直到濾紙和殘?jiān)鼪](méi)有綠色為止。最后，用乙醇定容至 100 mL，搖勻。取葉綠體色素提取物，在665nm、645nm和652nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以95%乙醇作為空白對(duì)照。

五、計(jì)算

根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理中提供的經(jīng)驗(yàn)公式，分別計(jì)算出植物材料中葉綠素a、b和總?cè)~綠素的含量。